نظرة عامة من Immunodiagnosis
1. الأساسية مفهوم
(1) الأجسام المضادة (Ab) و antigens (Ag)
الأجسام المضادة: فإنه يشير إلى واقية البروتين التي ينتجها الجسم بسبب مستضد التحفيز ، يفرز بواسطة المستجيب B خلايا في الفقاريات ، والتي يمكن تقسيمها إلى IgG ، IgM ، إيغا ، igD ، و إيج. IgG هو isotype مع أعلى محتوى في المصل وسوائل الجسم ، المحاسبة ل 75% إلى 80%. IgG هو الابتدائية الأجسام المضادة التي تنتجها الثانوية الاستجابة المناعية ، "القوة الرئيسية" من الجسم مكافحة العدوى ، و الأكثر استخداما الأجسام المضادة في immunodiagnosis.
مستضد: فإنه يشير إلى المادة التي يمكن يسبب إنتاج الأجسام المضادة و أي مادة التي يمكن لحث على المناعة استجابة في الجسم. Antigens هي الأجانب ، الجزيئات ، و محددة. خصوصية من مستضد يعني أن مستضد يمكن فقط ربط إلى المقابلة الأجسام المضادة أو المستجيب T خلايا ، التي الكيميائية مجموعات تحديد على جزيء سطح ، دعا antigenic المحددات. الوزن الجزيئي من مستضد عموما> 10kDa ، و أكبر الوزن الجزيئي ، أقوى antigenicity.
(2) Polyclonal الأجسام المضادة و الأجسام المضادة وحيدة النسيلة
Polyclonal الأجسام المضادة: الطبيعي مستضد جزيئات غالبا ما تحتوي على مجموعة متنوعة من مختلف antigenic epitopes ، تحفيز نظام المناعة في الجسم مع هذا مستضد يمكن تنشيط متنوعة من B الخليوي استنساخ في نفس الوقت ، و الناتجة الأجسام المضادة سوف تحتوي على مجموعة متنوعة من الأجسام المضادة ضد مختلفة epitopes ، ولذلك تسمى polyclonal الأجسام المضادة.
و وحيدة النسيلة الأجسام المضادة هو متجانسة للغاية الأجسام المضادة التي تنتجها واحد B الخليوي استنساخ التي فقط يستهدف محددة حاتمة. فمن عادة إعدادها باستخدام hybridoma التكنولوجيا. المستجيب B خلايا و myeloma خلايا وتنصهر لتشكيل B الخليوي hybridomas. A وحيدة النسيلة الأجسام المضادة يمكن تنتج بواسطة زراعة واحد hybridoma الخليوي في السكان من خلايا محددة ل حاتمة. تقارب و خصوصية من الأجسام المضادة وحيدة النسيلة هي عموما أفضل من تلك من polyclonal الأجسام المضادة.
(3) المؤتلف الأجسام المضادة و المؤتلف antigens
المؤتلف الأجسام المضادة: A وراثيا المهندسة الأجسام المضادة هو الأجسام المضادة المنتجة في المختبر باستخدام الجينات إعادة التركيب التكنولوجيا و البروتين الهندسة التكنولوجيا. الحصول على تسلسل الجينات من الأجسام المضادة ، بناء تعبير عن ناقلات ، و نقل ذلك إلى التعبير المضيف (مثل الخميرة ، الحشرات خلايا ، خلايا الثدييات ، أو البكتيريا). بهذه الطريقة ، إنتاج الأجسام المضادة هو تحررت من قيود نظام المناعة. في نفس الوقت ، كلا كامل طول الأجسام المضادة ومختلف الأجسام المضادة شظايا يمكن تنتج.
المؤتلف antigens: عموما ، و المؤتلف antigens الرجوع إلى المؤتلف البروتينات في جوهر و هي أيضا البروتينات المنتجة في المختبر بواسطة جين إعادة التركيب التكنولوجيا و البروتين الهندسة التكنولوجيا.
2. مبادئ immunodiagnosis
(1) طريقة مزدوجة وحيدة النسيلة الأجسام المضادة ساندويتش
مزدوجة وحيدة النسيلة الأجسام المضادة طريقة شطيرة: استخدام الصلبة مرحلة الناقل إلى معطف واحد الأجسام المضادة و التسمية آخر المسمى الأجسام المضادة للكشف عن مستضد لتكون اختبار ، و ثم تشكيل مجمع المغلفة Ab-Ag المسمى Ab. هذا الأسلوب أساسا يكتشف antigenic المواد.
صورة الائتمان: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(2) طريقة غير المباشرة
طريقة غير المباشرة: طريقة الكشف فيه المرحلة الصلبة الناقل يستخدم إلى لشل حركة مستضد و التسمية الثانوي الأجسام المضادة. هذا الأسلوب هو أساسا للكشف IgG الأجسام المضادة في عينات. معقدة من المغلفة Ag-الهدف Ab المسمى الثانوية Ab هو شكلت للكشف عن الأجسام المضادة في العينة.
صورة الائتمان: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(3) طريقة التقاط
التقاط طريقة: طريقة الكشف فيه المرحلة الصلبة الناقل يستخدم إلى معطف الثانوي الأجسام المضادة و آخر سلالة من المسمى مستضد للكشف عن الأجسام المضادة. معقدة من المغلفة الثانوية Ab-الهدف Ab المسمى Ag هو شكلت واختبارها. هذا الأسلوب هو أساسا للكشف IgM في عينة.
صورة الائتمان: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
(4) طريقة المنافسة
طريقة المنافسة: تنافسية ملزمة من المغلفة/المسمى الأجسام المضادة مع المسمى/المغلفة مستضد و اختبار مستضد. هذا الأسلوب هو أساسا للكشف طفيفة جزيء antigens.
صورة الائتمان: https://www.rockland.com/resources/elisa-technique/
طريقة 1: معطف الأجسام المضادة على المرحلة الصلبة ، وتسمية مستضد ، إضافة عينة ، و مستضد لفحصها تتنافس ل الأجسام المضادة ملزم الموقع ، غسل ، إخراج نتيجة
طريقة 2: معطف مستضد على المرحلة الصلبة ، تسمية الأجسام المضادة
3. تطوير immunodiagnosis
Immunodiagnosis ينطبق المناعة النظريات والتقنيات ، و يعني لتشخيص الأمراض المختلفة و تحديد حالة المناعة. مع تطوير التكنولوجيا ، immunodiagnosis خضع immunoelectrophoresis ، هطول و تراص فحوصات ، radioimmunoassay ، immunofluorescence ، انزيم المرتبطة immunosorbent الفحص ، immunoturbidimetry ، الغروية الذهب و الفلورسنت microsphere وسم ، النشاف غشاء شرائط ، chemiluminescence ، البروتين رقائق ، على microfluidics تكنولوجيا التحكم و واحدة جزيء كشف.
(1) انزيم المرتبطة immunosorbent الفحص (ELISA)
انزيم المرتبطة immunosorbent الفحص (ELISA) هو طريقة كشف أن يجمع مبدأ رد فعل المناعة مع الشلل التكنولوجيا و انزيم وسم التكنولوجيا. أولا ، استخدام البوليسترين متعددة جيدا لوحة إلى معطف مستضد/الأجسام المضادة ، ربط مادة لفحصها في عينة ، وإضافة الفجل peroxidase (HRP) أو القلوية phosphatase (AP) بعد غسل لتسمية الأجسام المضادة/مستضد لتشكيل المناعة معقدة. ثم إضافة الأنزيمية اللونية الركيزة و توقف حل لإنهاء رد فعل. أخيرا ، نوعيا أو كميا تحديد عينة المحتوى تحليلها بواسطة اللون OD.
صورة الائتمان: https://www.biotekchina.com.cn/التطبيقات/elisa-and-related-immunoassays.html
(2) الغروية الذهب/مضان immunochromatography
الذهب الغروية: الرجوع إلى الذهب سول مع فرقت المرحلة الجسيمات قطرها بين 1 و 150 نانومتر ، و اللون البرتقالي-الأحمر إلى الأرجواني-أحمر.
الغروية الذهب immunochromatography: تقنية الكشف يستخدم الغروية الذهب المسمى الأجسام المضادة ، استخدام النيتروسليلوز غشاء (NC غشاء) بمثابة المرحلة الصلبة الناقل إلى معطف مستضد/الأجسام المضادة ، و يستخدم عمل شعري من NC غشاء إلى كروماتوجرافيا السائل من واحد نهاية غشاء إلى الطرف الآخر ، في نفس الوقت ، و رد فعل المناعة يحدث خلال اللوني.
مضان immunochromatography: immunochromatographic كشف التكنولوجيا يغير الذهب الغروية في الفلورسنت microsphere وسم.
صورة الائتمان: https://www.researchgate.net/figure/A-The-composition-of-colloidal-gold-test-strip-B-Principle-of-the-CG-test-strip_fig5_340176469
(3) Chemiluminescence immunoassay
Chemiluminescence: يشير إلى انبعاث ضوء الذي يصاحب عملية التفاعلات الكيميائية.
Chemiluminescence immunoassay طريقة: تقنية الكشف يستخدم متعددة جيدا لوحة أو الجسيمات المغناطيسية كما الصلبة الناقلون إلى معطف مستضد/الأجسام المضادة ، إضافة تحليلها و luminophore لتسمية مستضد/الأجسام المضادة لتشكيل المناعة معقدة ، بعد غسل ، كيميائيا تحفيز معقدة أو الركيزة إلى ينبعث الضوء ، و يحدد محتوى تحليلها بواسطة التلألؤ كثافة.
صورة الائتمان: https://www.sepmag. الاتحاد الأوروبي/بلوق/محاولة/335317/على اثنين مفتاح-أسباب-ل-اختيار-chemiluminescence-ل-immunoassays
(4) تصنيف من chemiluminescence immunoassay
تصنيف بواسطة طلاء الناقل: وهي مقسمة الى لوحة chemiluminescence و المغناطيسي الجسيمات chemiluminescence. في الوقت الحاضر ، لوحة chemiluminescence تم القضاء.
تصنيف بواسطة التلألؤ: مقسمة إلى غير المباشرة التلألؤ (الأنزيمية) ، مباشرة التلألؤ (أكريدين استر ، luminol) ، و electrochemiluminescence.
